致对虾肝胰腺坏死病副溶血弧菌荧光定量PCR检测方法的建立

作者：陈平亚; 张亮亮; 吴少荣; 黄纪徽; 王绥家; 吴山楠^*

来源：广东农业科学, 2021, 48(11): 119-125.

DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2021.11.015

• 对虾
• 急性肝胰腺坏死病
• 副溶血弧菌
• pirB基因
• 荧光定量PCR

【目的】建立一种对虾急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease)病原菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus, VpAHPND)荧光定量PCR检测方法,对该病进行快速检测。【方法】根据副溶血弧菌基因保守序列设计特异性引物和探针,经优化反应体系及条件,建立检测VpAHPND的荧光定量PCR方法;以重组质粒为标准品制作标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。【结果】该方法定量范围宽,起始模板浓度范围为2.3×101～2.3×107拷贝/μL时,标准曲线具有良好的线性关系;最低检测限为2.3拷贝/μL,与对虾其他病原菌及病毒无交叉反应,重复试验变异系数为0.45%～0.69%,可在1 h内完成样品检测;对临床对虾样品的检测结果表明,该方法与世界动物卫生组织(OIE)推荐的套式PCR法检测结果一致。【结论】应用TaqMan探针建立的检测VpAHPND的荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,可有效用于临床对虾样品的VpAHPND检测。

• 单位
  海口海关技术中心