基于ThT荧光寿命检测蛋清溶菌酶蛋白寡聚体

作者：李成; 宋吉雪; 刘婷婷; 李妍; 刘冰南; 王亮; 肖珊; 李琳; 耿旭辉^*; 王际辉^*

来源：高等学校化学学报, 2019, 40(01): 90-95.

• 寡聚体
• 硫磺素T
• 时间相关单光子计数
• 荧光寿命

采用时间分辨荧光技术,检测了不同形态蛋白聚集体的荧光染料硫磺素T(ThT)荧光寿命.利用蛋清溶菌酶体外制备了蛋白聚集体;采用透射电子显微镜(TEM)及ThT稳态荧光检测了结合蛋白纤维生长的动力学曲线,确定其形成寡聚体及纤维样聚集体的特征和时间.通过时间相关单光子计数(TCSPC)技术测定了蛋清溶菌酶单体、寡聚体和淀粉样纤维的ThT荧光寿命曲线,并拟合、计算其荧光寿命.根据圆二色谱(CD)分析结果推测聚集体的结构不同导致其与ThT的结合状态不同,从而影响ThT荧光寿命.结果表明,通过测定ThT荧光寿命可以区分蛋白单体、寡聚体和纤维样聚集体,并监测蛋白寡聚体的形成,为后续病理蛋白聚集过程中形成寡聚体物质的监测提供了研究基础.

• 单位
  生物工程学院; 东莞理工学院; 大连工业大学; 中国科学院