构建过表达/干扰多梳蛋白2的人胶质瘤细胞系

作者：唐翠; 徐辉; 秦治武; 曹相玫^*

来源：宁夏医科大学学报, 2023, 45(01): 14-19.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2023.01.003

• 多梳蛋白2
• 重组慢病毒
• 胶质瘤

目的 构建过表达/干扰多梳蛋白2(polycomb-like 2,PCL2)基因重组慢病毒并稳转胶质瘤U251细胞系。方法 过表达PCL2重组慢病毒载体pLVX-hPCL2-3flag-ZsGreen-Puro和干扰PCL2重组慢病毒载体pLVXshRNA2-Puro-hPCL2通过克隆技术成功构建，在293T细胞中导入质粒载体完成慢病毒包装，经过干预HEK293获得转染效率，病毒滴度采用逐孔稀释梯度法测得。将构建好的hPCL2/shRNA PCL2重组慢病毒转染胶质瘤U251细胞，倒置显微镜下观察荧光强度及范围，Western blot检测PCL2蛋白的表达情况。结果 成功构建hPCL2/shRNA PCL2重组慢病毒载体，Western blot结果显示，相比对照组和空载组，目的蛋白在转染过表达PCL2重组慢病毒U251细胞中表达明显升高，在转染干扰PCL2重组慢病毒U251细胞中表达降低（P均<0.05）。结论 成功构建hPCL2/shRNA PCL2重组慢病毒的U251细胞系。

• 单位
  宁夏医科大学; 基础医学院