沉默Sp5对mEPMCs中Wnt信号通路相关因子及增殖能力的影响

作者：柏宇; 兰雪娇; 唐璟; 文雨; 吕明敏; 宋庆高

来源：天津医药, 2023, 51(12): 1314-1321.

• Sp转录因子类
• Wnt信号通路
• 细胞增殖
• 腭突间充质细胞
• Sp5基因

目的 探讨沉默转录因子特异蛋白5(Sp5)对小鼠胚胎腭突间充质细胞（m EPMCs）中Wnt信号通路相关因子及增殖能力的影响。方法 体外分离并培养孕14.5 d C57BL/6J小鼠的mEPMCs，细胞免疫荧光染色鉴定细胞来源；利用慢病毒转染技术沉默mEPMCs中Sp5基因的表达，Western blot验证转染效率。后续实验设空白对照组、空载病毒组、沉默组（Sp5-shRNA组）。各组细胞转染72 h后，采用Western blot及RT-qPCR法分别检测β-连环蛋白（β-catenin）、丝氨酸/苏氨酸激酶（GSK-3β）、Wnt家族成员3a(Wnt3a)、特异性周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白及m RNA的表达；CCK-8法检测细胞增殖能力；免疫荧光法检测5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）阳性细胞增殖率；流式细胞术检测细胞周期。结果 成功分离mEPMCs并沉默Sp5的表达。Western blot及RT-qPCR结果显示，Sp5-shRNA组β-catenin、GSK-3β、Wnt3a、CyclinD1蛋白及mRNA表达水平均高于空白对照组和空载病毒组（P<0.05）;Sp5-shRNA组细胞增殖能力和EdU阳性细胞增殖率均高于空白对照组和空载病毒组（P<0.05）;Sp5-shRNA组mEPMCs处于S期的细胞比例高于空白对照组和空载病毒组（P<0.05）。结论 沉默m EPMCs中Sp5可通过对Wnt信号通路的调控来参与腭的发育，促进mEPMCs的增殖。

• 单位
  遵义医科大学