表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及生物学特性分析

作者：李晓涵; 杨伏春; 刘芮; 高立; 崔红玉; 张艳萍; 刘长军; 祁小乐; 王笑梅^*; 高玉龙^*; 李凯^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(02): 656-662.

• 鸡传染性法氏囊病
• 火鸡疱疹病毒
• VP2基因
• 生物学特性

鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒(HVT)活载体疫苗，本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体，获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下，连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应，构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞(CEF),拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测，并绘制重组病毒体外生长曲线，分析其体外复制特性。结果表明，重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白，rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体，并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础，对IBD的防控具有重要意义。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所