分枝杆菌RpsI序列差异对核糖体结构与功能的影响

作者：苏梦; 吕亮东^*

来源：微生物与感染, 2020, 15(05): 293-301.

DOI：10.3969/j.issn.1673-6184.2020.05.005

• 结核分枝杆菌
• 核糖体
• 核糖体蛋白RpsI
• 结构与功能

核糖体结构存在动态调控,其变化与细菌发育、环境适应等过程密切相关。使用NCBI BLAST比对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)核糖体蛋白RpsI、RpmI和RpmJ与耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)相应蛋白的氨基酸序列,发现RpsI N端氨基酸序列存在较大差异。为了探究该N端序列差异对核糖体结构与功能的影响,将表达有结核分枝杆菌rpsI基因(rpsIRv)的质粒整合至耻垢分枝杆菌基因组中,并利用同源重组的方法敲除耻垢分枝杆菌rpsI基因,以此构建重组菌株。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结果表明该重组菌株构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示0.5mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃可诱导表达RpsIRv。用纯化的RpsIRv制备特异性多克隆抗体,其效价为1 600 000。反转录PCR和蛋白质印迹法(Western blot)显示rpsIRv在重组菌株中成功表达。测定重组菌株与空载对照菌株在不同温度下的生长曲线,该重组菌株在不同温度下的生长速率未发生改变。采用通用液体倍比稀释法测定作用于核糖体不同位点的5种抗生素最小抑菌浓度(MIC90),重组菌株对阿米卡星(作用于核糖体小亚基A位点的抗生素)的敏感性升高,提示分枝杆菌RpsI序列差异导致核糖体小亚基A位点附近的结构发生改变,这为分枝杆菌核糖体结构与功能的机制研究提供了数据。

• 单位
  基础医学院