鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的原核表达及其对巨噬细胞凋亡的影响

作者：翟凯新; 刘丽婷; 陈晓文; 陈越; 高婧华; 吴利先^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(11): 1257-1261.

DOI：10.13350/j.cjpb.201104

• 鸟分枝杆菌
• PPE25-MAV蛋白
• Ana-1巨噬细胞
• 细胞凋亡

目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒pET-32a-ppe25,转入感受态细胞BL21(DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白PPE25-MAV。用Ni Resin FF纯化蛋白,并作用于巨噬系Ana-1细胞,流式细胞术(FCM)检测巨噬细胞凋亡率并且分析其变化。结果鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白表达载体构建成功,转化至BL21(DE3)后经IPTG诱导表达约59ku的蛋白,与预期大小相符;Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的PPE25-MAV蛋白作用小鼠巨噬系Ana-1细胞,与空白对照组相比,作用2h后细胞的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞的晚期凋亡率和总凋亡率在0.5μg/ml与1μg/ml时均低于空白组(P<0.05),2μg/ml与5μg/ml的凋亡率与对照组比较差异无统计学意义;作用10h细胞的早期凋亡率仅在5μg/ml时升高(P<0.05),0.5、1和2μg/ml剂量组差异无统计学意义(P>0.05),细胞晚期凋亡率和总凋亡率在2μg/ml和5μg/ml时显著降低(P<0.05),0.5μg/ml和1μg/ml组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组质粒诱导表达的PPE25-MAV蛋白存在于上清和包涵体中,但主要以包涵体形式表达。纯化的PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡有抑制作用,且主要作用于巨噬细胞的晚期凋亡阶段。

• 单位
  基础医学院; 大理大学