中华蜜蜂气味受体基因AcerOr1 RNA最佳干扰片段的筛选

作者：郭丽娜; 赵慧婷; 任有蛇; 徐兵; 姜玉锁^*

来源：环境昆虫学报, 2020, 42(05): 1068-1075.

• 中华蜜蜂
• AcerOr1基因
• RNA干扰

为了更好地筛选出中华蜜蜂气味受体基因AcerOr1有效干扰序列,本研究以中华蜜蜂气味受体基因AcerOr1为靶标,分别选取3个片段AcerOr1-1(429 bp)、AcerOr1-2(218 bp)和AcerOr1-3(543 bp),并构建相应的dsRNA表达载体,获取dsRNA后通过单只饲喂进行体内RNAi实验,运用qPCR和Western blot从mRNA水平和蛋白水平检测干扰效率。实验结果显示:片段大小429 bp组dsAcerOr1-1和对照组mRNA表达量之间不具有显著的统计学差异(P>0.05),片段大小为218 bp的dsAcerOr1-2组和片段大小为543 bp的dsAcerOr1-3组对AcerOr1表达量都有显著的抑制(P<0.05),抑制率分别为88.85%±0.12%和69.16%±1.06%,以片段大小为218 bp的dsAcerOr1-2干扰效果最佳。Western blot结果显示:与mRNA表达水平检测结果一致,饲喂dsAcerOr1-1 AcerOr1蛋白的表达量与对照组差异不显著(P>0.05),而饲喂dsAcerOr1-2和dsAcerOr1-3后AcerOr1蛋白的表达量均受到显著抑制(P<0.05)。本试验成功构建AcerOr1基因干扰载体,最终确定218 bp的dsAcerOr1-2为最佳干扰片段,证实其能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因的体内外功能奠定了基础。

• 单位
  动物科技学院; 山西农业大学