残留基因组对miRNA检测的影响评估

作者：孙启凡; 李冉冉; 赵一霞; 舒跹; 何红霞; 胡胜; 季安全^*

来源：刑事技术, 2020, 45(01): 9-13.

DOI：10.16467/j.1008-3650.2020.01.002

• 法医遗传学
• RNA提取
• RNA纯化

目的研究判断常规试剂盒所提RNA中残留的基因组是否会对后续RNA检测产生影响并建立相应的纯化应对策略。方法使用miRNeasy?Mini Kit提取外周血和月经血样本中的RNA,用TURBO DNA-free?Kit对部分RNA纯化,通过紫外荧光定量、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量检测等方法对比纯化前后是否存在显著差异性,并使用琼脂糖凝胶电泳以及毛细管电泳DNA分型扩增来判断外周血样本中提取的RNA是否有基因组残留。结果使用试剂盒进行DNA纯化后可有效去除残留的基因组DNA。纯化后的RNA浓度较纯化前大都有所下降;琼脂糖电泳结果显示纯化后无DNA条带,RNA条带纯化前后差异不大,完整性良好;RNA实时荧光定量检测结果显示单个microRNA(miRNA)在纯化前后有些会存在总量上的差异,但6种miRNA在外周血和月经血中相对表达量高低始终保持一致。结论常规RNA提取试剂盒所提RNA中含有的DNA会影响部分miRNA检测结果,但不会影响对体液组织属性来源的判定。对提取的RNA进一步纯化可有效去除基因组DNA残留,但同时会影响RNA总量。要根据实际研究需要,决定是否应该予以纯化。

• 单位
  济宁医学院; 公安部物证鉴定中心; 山西医科大学