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摘要
【目的】确定引起广西人工养殖牛蛙(Rana catesbeiana)发病死亡的病原菌，了解其致病性、组织病理学特征、耐药性及耐药基因的携带情况，为该病的临床诊断及合理预防提供科学依据。【方法】采用常规细菌分离纯化方法从患病牛蛙的病灶组织中分离优势菌株，通过观察分离菌株的形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析等对病原菌进行鉴定，以纸片扩散法测定其耐药性，通过PCR扩增分析其耐药基因和毒力基因携带情况，通过人工回归感染试验确定病原菌的致病性，并通过组织病理学探究牛蛙感染菌株后的组织特性。【结果】从患病牛蛙腿部分离得到1株优势菌株(编号NFAH-5)，综合其形态学、生理生化特性、溶血特性及分子鉴定结果，确定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。菌株NFAH-5对多西环素、多粘菌素B和庆大霉素等6种抗生素敏感，对头孢拉定、恩诺沙星和阿莫西林等12种抗生素已产生耐药性；经耐药基因PCR检测，发现该分离菌携带Ant(3″)-I、Intl1和parC等9种耐药基因，与耐药表型基本一致。毒力基因PCR检测结果显示，菌株NFAH-5携带Ser、aer、Lip、exu、LuxS、act和aha等7种毒力基因。人工回归感染试验结果表明，菌株NFAH-5感染牛蛙的半数致死剂量(LD50)为1.55×106CFU/mL，感染后发病牛蛙表现四肢底侧充血发红，肝肿大呈红褐色或黄色，肠内空虚或有出血，肾充血发红，与自然发病牛蛙的症状相似。患病牛蛙的肝细胞发生变性，脾脏红、白髓质间很难辨出，可见大量血源性色素沉着物，肾小球萎缩，肾小管发生玻璃样变。【结论】嗜水气单胞菌是引起广西南宁人工养殖牛蛙发生红腿病的致病菌，结合农业农村部《水产养殖用药明白纸2022年2号》文件中批准使用的药物目录，建议选用敏感药物多西环素进行防治。
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