miR-106a-5p靶向调控ERK2对胃癌细胞顺铂耐药性的影响及其分子机制

作者：杨万荷; 李家群; 张东艳; 王昌高; 昝慧

来源：山东医药, 2021, 61(17): 14-19.

DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2021.17.004

• 胃癌
• miR-106a-5p
• 细胞外信号调节激酶2
• 顺铂
• 化疗耐药
• 增殖凋亡相关蛋白
• 上皮间质转化
• 耐药基因

目的观察微小RNA106a-5p(miR-106a-5p)通过靶向调控细胞外信号调节激酶2(ERK2)对胃癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响,并探讨其可能的分子机制。方法建立胃癌细胞系MGC-803 DDP耐药细胞株MGC-803/DDP,采用RT-PCR法检测MGC-803及MGC-803/DDP中miR-106a-5p及ERK2的表达。在线生物信息学软件starBase和Targetscan7.2预测miR-106a-5p与ERK2是否存在结合位点,采用荧光素酶报告实验进一步验证二者的靶向调控关系。将MGC-803/DDP分为mimic组(转染miR-106a-5p mimic)、ERK2组(转染pcDNA3.1-ERK2)、mimic+ERK2组(共转染miR-106a-5p mimic和pcDNA3.1-ERK2)、NC组(不转染),采用EdU染色实验观察各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测增殖凋亡相关蛋白(Cyclin D1、Caspase3)、上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)及耐药基因MDR1表达变化,MTT法检测细胞对DDP的耐药性。结果MGC-803/DDP细胞中miR-106a-5p相对表达量低于MGC-803细胞,ERK2 mRNA相对表达量高于MGC-803细胞(P均<0.05)。预测显示,miR-106a-5p与ERK2存在连续结合位点;荧光素酶报告实验结果显示,miR-106a-5p可靶向负调控ERK2。EdU阳性细胞数ERK2组>NC组>mimic+ERK2组>mimic组,细胞凋亡数mimic组>NC组>mimic+ERK2组>ERK2组,贴壁细胞数ERK2组>NC组>mimic+ERK2组>mimic组(P均<0.05)。细胞中Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、MDR1表达ERK2组>mimic+ERK2组>NC组>mimic组,Caspase3、E-cadherin表达mimic组>mimic+ERK2组>NC组>ERK2组(P均<0.05)。DDP对细胞的半数抑制浓度ERK2组>NC组>mimic+ERK2组>mimic组(P均<0.05)。结论 miR-106a-5p通过靶向抑制ERK2表达降低胃癌细胞对DDP的耐药性,该机制可能与改变增殖凋亡相关蛋白表达、逆转上皮间质转化过程、降低耐药基因MDR1水平有关。

• 单位
  海南省人民医院; 海口市人民医院