猪流行性腹泻病毒RPA-LFD检测方法的建立

作者：袁嘉康; 李林岳; 庞俊增; 范国英; 姜金庆; 王自良; 李任峰^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(06): 1127-1132.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.06.01

• 猪流行性腹泻病毒
• 重组酶聚合酶等温扩增
• 侧流层析试纸
• M基因

将重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)与侧流层析试纸(lateral flow dipstick, LFD)技术相结合，根据猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)M基因保守序列设计特异性引物，上、下游引物的5′端分别进行6-羧基荧光素(FAM)和生物素(biotin)标记，通过优化RPA反应温度和时间条件，建立基于RPA-LFD的PEDV快速检测方法，并对该方法的灵敏性、特异性和临床应用进行评价。结果显示，该方法在40.8℃恒温反应21 min即可完成对PEDV核酸的扩增，RPA-LFD的最低检测限为1.27×102 拷贝/μL,且与猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等均无交叉反应；22份临床样本检测结果显示RPA-LFD与RT-PCR检测结果完全一致。结果表明，本试验建立的PEDV RPA-LFD检测方法具有操作方便、检测速度快、灵敏度高、特异性强等优点，为PEDV的现场快速检测和流行病学调查提供了新的技术手段。

• 单位
  河南科技学院; 动物科技学院