虎杖PcMYB1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：林艳丽; 李鲁汉; 廖辉; 覃建兵; 伍翔; 王岩岩; 吴端阳; 张鸿杰; 柳忠玉^*

来源：长江大学学报(自然科学版), 2020, 17(03): 91-10.

DOI：10.16772/j.cnki.1673-1409.2020.03.015

• 虎杖(Polygonum cuspidatum)
• PcMYB1基因
• MYB转录因子
• 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)

为建立实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测虎杖(Polygonum cuspidatum)转录因子PcMYB1基因表达的方法,将PcMYB1基因的ORF片段亚克隆于pUC19载体,得到重组质粒pUC19-PcMYB1,再以pUC19-PcMYB1作为标准样品,建立目的基因的标准曲线,优化qRT-PCR反应体系与反应条件,分析qRT-PCR的灵敏度。结果表明,在qRT-PCR体系中,退火温度为54.1℃时检测结果最好;构建的目的基因标准曲线,其循环阈值与模板拷贝数对数值呈良好的线性关系,扩增效率为92.3%;该方法最低可检测101copies/μL的目的基因。

• 单位
  长江大学; 生命科学学院