人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定

作者：刘惠荣; 吴刚; 周冰; 申乐; 薛红; 陈保生

来源：免疫学杂志, 2008, (06): 684-687.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20080182

• 磷脂转移蛋白
• 原核表达
• 抗体 Phospholipid transfer protein
• Prokaryotic expression
• Antibody

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核...

• 单位
  中国医学科学院; 中国协和医科大学; 内蒙古农业大学; 生物工程学院; 医学分子生物学国家重点实验室