发育期大鼠癫痫脑损伤中自噬相关基因的变化

作者:李沁芮; 韩颖*; 杜军保; 金红芳; 张静; 牛曼曼; 秦炯
来源:中华实用儿科临床杂志, 2018, 33(12): 909-912.
DOI:10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2018.12.008

摘要

目的探讨Beclin-1、P62/SQSTM1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和unc-51样自噬活化激酶1(ULK-1)等自噬相关分子mRNA水平在发育期大鼠癫痫脑损伤前后的变化。方法 21日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠72只,按随机数字表法随机分为对照组和癫痫组。每组按时间点不同(3 h、6 h、12 h和48 h)随机分4个亚组,每个亚组9只大鼠。癫痫组采用腹腔注射卡因酸(12 mg/kg)诱导癫痫发作建立癫痫动物模型,对照组予等量9 g/L盐水腹腔注射。2组大鼠分别于注射卡因酸3 h、6 h、12 h和48 h后,予水合氯醛麻醉,处死并取出脑组织。Nissl染色法检测大鼠大脑皮层神经元损伤情况;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测癫痫大鼠大脑神经元凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测Beclin-1、P62/SQSTM1、LC3、ULK-1 mRNA水平。结果 Nissl染色显示:随时间推移,癫痫组大鼠大脑皮层神经元尼氏体颜色变浅,结构紊乱;癫痫48 h组Nissl染色阳性细胞数[(82±8)个]明显少于对照组[(122±8)个],差异有统计学意义(F=3.768,P=0.01)。TUNEL方法显示癫痫48 h组大鼠大脑皮层凋亡神经元[(13±7)个]明显高于对照组[(2±1)个],差异有统计学意义(t=-3.821,P=0.003)。qPCR显示Beclin-1、P62/SQSTM1、LC3、ULK-1 mRNA水平在癫痫组12 h组(1.70±0.75、1.75±0·77、1.52±0.43、7.48±6.12)和癫痫48 h组(1.63±0.43、1.48±0.74、1.74±0.55、7.69±5.65)均明显高于对照组(1.00、1.00、1.00、1.00),差异均有统计学意义(F=2.820、3.452、5.811、5.002,均P<0.05)。结论自噬的活化先于凋亡发生,自噬相关分子可能参与发育期大鼠癫痫所致脑损伤的发病过程。

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