Zika病毒NS3具有依赖于ATP水解的dsDNA解链活性

作者：徐杉; 王蕾杰; 石磊

来源：基础医学与临床, 2018, 38(05): 674-678.

DOI：10.3969/j.issn.1001-6325.2018.05.019

• Zika病毒
• NS3蛋白
• ATP
• dsDNA
• 解旋酶

目的研究Zika病毒NS3蛋白是否具有依赖于ATP水解的ds DNA解链活性。方法构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21菌株中表达带有His标签的Zika NS3蛋白,并用Ni琼脂糖珠进行纯化;利用ATPase检测试剂盒对NS3的ATP水解活性进行检测;利用荧光共振能量转移(FRET)原理,对NS3的ds DNA解链活性进行实时动力学检测;利用定点突变方法将NS3蛋白的第198位甘氨酸(G)突变为丙氨酸(A),得到G198A突变体,检测其是否影响NS3解旋酶活性。结果 Zika NS3蛋白在体外可以水解ATP,酶解最大反应速率为2.76μmol/(L·min),Km值为0.11 mmol/L;Zika NS3蛋白在体外可以解链ds DNA;G198A突变体与野生型相比,ATP水解速率和ds DNA的解链速率均明显减弱。结论 Zika NS3蛋白在体外具有ATP水解活性以及ds DNA解链活性,且第198位甘氨酸对于NS3酶活性至关重要。

• 单位
  中国医学科学院基础医学研究所; 医学分子生物学国家重点实验室; 北京协和医学院