用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测

作者：王鹏举; 王依依; 张仪婷; 杨甜; 宋源; 赵晶; 阎博^*; 杨安钢^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2021, 37(07): 590-595.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009221

• 金黄色葡萄球菌蛋白A (SPA)
• 链球菌蛋白G(SPG)
• 辣根过氧化物酶(HRP)
• 融合蛋白
• 真核表达

目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达。通过SDS-PAGE、 Western blot法鉴定融合蛋白表达情况,通过Western blot法、 ELISA、免疫组织化学实验验证其应用。结果酶切鉴定和基因测序显示pPA-HRP、 pPG-HRP和pPA/G-HRP表达质粒构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot法结果表明,融合蛋白PA-HRP、 PG-HRP和PA/G-HRP在HEK293F细胞中成功表达。Western blot法、 ELISA和免疫组织化学结果显示,三种融合蛋白均能识别结合小鼠及兔来源的IgG,其中PA/G-HRP表现出更为灵敏的结合活性。结论成功制备了具有高亲和力、通用型二抗功能的融合蛋白,PA/G-HRP能够替代传统抗小鼠IgG及抗兔IgG,可用于多种免疫检测实验。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 基础医学院; 新乡医学院