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摘要
目的研究人乳头瘤病毒16型致癌基因E6(HPV16-E6)及相关蛋白在宫颈癌组织中的表达,探讨其促进肿瘤相关巨噬细胞代替性活化的机制。方法选取2015-01-02-2016-03-31武汉大学中南医院确诊的45例宫颈癌标本进行免疫组织化学染色,分析HPV16-E6、巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、CXC趋化因子受体2(CXCR2)、白细胞分化抗原206(CD206)在宫颈癌和癌旁组织中的表达及与临床病理特征的关系。用HPV16-E6过表达质粒和干扰质粒分别转染人宫颈癌细胞C33A(C33A-E6)和Siha(Siha-shRNA),将转染后的宫颈癌细胞与人巨噬细胞共培养,检测巨噬细胞CXCR2 mRNA表达量。将巨噬细胞分别与HPV16-E6过表达质粒转染的C33A细胞(C33A-E6)和对照组C33A细胞(C33A-NC)共培养后根据分组分别采用MIF抑制剂、CXCR2抑制剂以及rhMIF进行处理,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg1)和白介素10(IL-10)mRNA的表达量,流式细胞仪检测各处理组白细胞分化抗原80(CD80)和CD206阳性细胞比例。结果宫颈癌组织中CXCR2(t=9.980,P=0.021)和CD206的表达量(t=10.070,P=0.015)与患者年龄有统计学意义关联;MIF表达量与患者分期有关联,t=12.560,P=0.024;CD206与患者肿瘤大小有关联,t=8.370,P=0.029。HPV16-E6、MIF、CXCR2和CD206在癌组织中的表达高于癌旁组织,差异有统计学意义,t值分别为20.340、12.330、22.970和7.920,均P<0.05;且MIF表达与HPV16-E6呈正相关(r=0.486,P<0.001),CXCR2与HPV16-E6呈正相关(r=0.563,P<0.001),CD206与HPV16-E6呈正相关(r=0.482,P<0.001),MIF(r=0.740,P<0.001)和CXCR2(r=0.731,P<0.001)表达均与CD206呈正相关。与C33A-E6共培养的巨噬细胞CXCR2 mRNA表达量(4.320±0.080)高于C33A-NC组(1.820±0.290),差异有统计学意义,t=9.850,P=0.037;与Siha-shRNA共培养的巨噬细胞中CXCR2 mRNA的表达量(2.010±0.020)低于与Siha细胞共培养组(10.610±2.300),差异有统计学意义,t=14.870,P=0.009。与C33A-E6共培养的巨噬细胞中TNF-α的表达量(0.410±0.100)低于C33A-NC组(0.960±0.040),差异有统计学意义,t=8.845,P=0.001;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中iNOS的表达量(0.590±0.060)低于C33A-NC组(1.200±0.260),差异有统计学意义,t=3.960,P=0.017;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中Arg1的表达量(6.860±0.490)高于C33A-NC组(1.240±0.140),差异有统计学意义,t=7.410,P=0.030;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中IL-10的表达量(50.770±4.560)高于C33A-NC组(0.880±0.160),差异有统计学意义,t=14.690,P=0.014;当分别根据不同分组采用MIF抑制剂、CXCR2抑制剂或rhMIF处理后相应标志物的表达量发生逆转。与C33A-E6共培养的巨噬细胞中CD206阳性巨噬细胞比例[(38.020±1.330)%]高于C33A-NC组[(20.070±3.490)%],差异有统计学意义,t=15.420,P=0.001;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中CD80阳性巨噬细胞比例[(12.560±2.390)%]低于C33A-NC组[(15.860±3.010)%],差异有统计学意义,t=13.980,P=0.045,当加入MIF抑制剂或CXCR2抑制剂后结果发生逆转。结论 HPV16-E6及相关蛋白在宫颈癌组织中高表达,且CXCR2和CD206与患者年龄,MIF与肿瘤分期,CD206与肿瘤大小有关联;HPV16-E6能通过MIF/CXCR2信号通路诱导巨噬细胞代替性活化。
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单位武汉大学中南医院
