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摘要
目的 研究Hedgehog信号通路抑制剂维莫德吉(GDC-0449)对CCl4联合二乙酰氨基芴(2-AAF)诱导的大鼠肝纤维化的干预作用。方法 将18只Fisher344雌性大鼠随机分为正常组、CCl4联合2-AAF模型组(CCl4/2-AAF组)和GDC-0449组，每组6只。CCl4/2-AAF组和GDC-0449组大鼠按2 mL/kg体质量皮下注射30%CCl4-橄榄油溶液，每周2次，持续造模6周；自第7周始，在注射CCl4-橄榄油溶液同时予2-AAF(100 mg·kg-1·d-1)灌胃，同时GDC-0449组大鼠按25 mg·kg-1·d-1灌胃干预，正常组大鼠予等体积橄榄油溶液注射及生理盐水灌胃,9周末处死取材。HE染色和天狼猩红(SR)染色观察各组大鼠肝组织病理及胶原沉积变化,SR阳性染色面积半定量分析和Ishak评分评估纤维化程度；碱水解法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)水平；免疫组化、Western Blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、细胞角蛋白(CK)19、CK7、上皮细胞黏附分子(Epcam)及Hedgehog信号通路表达变化；免疫荧光共染观察CK19和卵圆细胞标志物6(OV6)共定位情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与正常组相比,CCl4/2-AAF组大鼠肝组织炎性细胞聚集、胶原纤维沉积明显，存在明显的假小叶结构；肝组织Hyp水平和胶原阳性面积比显著增加(P值均<0.05),Ishak评分显著上升(P<0.05);α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅳ、Epcam、CK19、CK7、跨膜转运蛋白Smoothened(Smo)、Hedgehog配体Desert Hedgehog(Dhh)、Indian Hedgehog结合膜受体Patched(Ptch2)、胶质瘤相关致癌基因(Gli1、Gli2、Gli3)的表达显著增多(P值均<0.05);免疫荧光共染显示CCl4/2-AAF组大鼠肝组织内CK19阳性细胞均表达OV6,且较正常组显著增多。与CCl4/2-AAF组相比,GDC-0449组肝组织炎性细胞聚集、胶原沉积明显减少；肝组织Hyp水平、胶原阳性面积比显著降低(P值均<0.05),Ishak评分显著下降(P<0.05);α-SMA、Epcam、CK19、CK7、Smo、Ptch2、Gli1、Gli2和Gli3的表达显著减少(P值均<0.05);免疫荧光共染显示肝组织内共表达OV6与CK19的阳性细胞数显著减少。结论 Hedgehog信号通路抑制剂GDC-0449显著抑制了CCl4/2-AAF诱导的大鼠肝纤维化进展，且其作用机制与抑制肝星状细胞活化、胶原沉积，阻抑肝祖细胞活化增殖，并抑制其向胆管上皮细胞分化有关。
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