双靶标实时荧光PCR检测技术用于牛结核病快速诊断的研究

作者：欧喜超; 赵冰; 滕冲; 张思琦; 许晔; 邢睿达; 裴少君; 夏辉; 王胜芬; 范伟兴; 赵雁林^*

来源：中国防痨杂志, 2023, 45(11): 1052-1057.

DOI：10.19982/j.issn.1000-6621.20230202

• 结核,牛
• 动物疾病
• 分子探针技术
• 诊断

目的:针对结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC)IS6110和IS1081基因，开发双靶标实时荧光PCR检测技术并评价其在剖检奶牛病料中进行MTBC快速检测的可行性，为分子检测技术在牛结核病早期诊断领域的推广应用提供基础数据支持。方法:以IS6110和IS1081为特异靶基因建立MTBC实时荧光PCR检测体系；通过制备并检测含有不同浓度牛分枝杆菌菌悬液的牛肺组织，确定双靶标实时荧光PCR检测体系的检出限；使用21株常见非结核分枝杆菌标准株的DNA作为扩增模板，确定双靶标实时荧光PCR检测MTBC的特异度；对剖检奶牛组织病料进行MGIT 960液体培养、Xpert MTB/RIF(简称“Xpert”)、Xpert MTB/RIF Ultra(简称“Xpert Ultra”)和双靶标实时荧光PCR检测，以液体培养结果为参照标准，分析双靶标实时荧光PCR检测在剖检奶牛病料中检测MTBC的效能。结果:双靶标实时荧光PCR检测21株非结核分枝杆菌菌株的DNA,均未检测到扩增曲线，MTBC检测特异度为100.0%(21/21)。组织病料液体培养、Xpert、Xpert Ultra和双靶标荧光PCR检测阳性率分别为64.0%(32/50)、56.0%(28/50)、78.0%(39/50)和76.0%(38/50)。双靶标荧光PCR检测阳性率明显高于Xpert检测阳性率，差异有统计学意义(χ2=4.456,P=0.035),双靶标荧光PCR检测阳性率与Xpert Ultra检测阳性率差异无统计学意义(χ2=0.056,P=0.812)。以液体培养结果为参照标准，双靶标荧光PCR检测MTBC的敏感度和特异度分别为90.3%(28/31)和40.0%(6/15);Xpert Ultra检测MTBC的敏感度和特异度分别为96.8%(30/31)和40.0%(6/15)。结论:双靶标荧光PCR检测技术可用于牛结核病的早期快速诊断，有助于控制人畜共患结核病的流行和传播。

• 单位
  公共卫生学院; 北京大学; 中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心; 中国动物卫生与流行病学中心; 厦门大学; 生命科学学院