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摘要
目的评价褪黑素预处理对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠48只, 10～12周龄, 体重200～230 g, 采用随机数字表法分为4组(n=12):对照组(Con组)、NAFLD组、NAFLD+肝缺血再灌注组(NAFLD+HIR组)和NAFLD+肝缺血再灌注+褪黑素预处理组(NAFLD+HIR+MT组)。NAFLD组、NAFLD+HIR组及NAFLD+HIR+MT组连续8周喂养高脂高糖饲料(含10%糖、10%脂肪), 其余组大鼠喂养普通饲料, 自由饮水。NAFLD+HIR+MT组造模前连续2周每天予以褪黑素10 mg/kg灌胃预处理。采用夹闭肝动脉和门静脉20 min后开放5 min, 再次夹闭20 min后恢复灌注的方法制备肝缺血再灌注损伤模型。再灌注6 h时收集下腔静脉血标本和肝组织, 检测血清胰岛素、血糖、游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、ALT、AST和铁蛋白水平, 计算胰岛素抵抗指数。采用ELISA法检测肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、ROS、SOD和Fe2+的水平, HE染色后光镜下观察肝组织病理学结果, 采用Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、溶血卵磷脂酰基转移酶3(LPCAT3)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达水平。结果与Con组相比, NAFLD组血清FFA、TG、ALT、AST、铁蛋白水平和胰岛素抵抗指数升高, 肝组织ROS和Fe2+水平升高, GSH-Px和SOD水平降低, ACSL4和LPCAT3表达上调, Nrf2和GPX4表达下调(P<0.05);与NAFLD组相比, NAFLD+HIR组血清FFA、TG、ALT、AST、铁蛋白水平和胰岛素抵抗指数升高, ROS和Fe2+水平降低, GSH-Px和SOD水平升高, ACSL4和LPCAT3表达上调, Nrf2和GPX4表达下调(P<0.05);与NAFLD+HIR组相比, NAFLD+HIR+MT组血清FFA、TG、ALT、AST、铁蛋白水平和胰岛素抵抗指数降低, 肝组织ROS和Fe2+水平降低, GSH-Px和SOD水平升高, ACSL4和LPCAT3表达下调, Nrf2和GPX4表达上调(P<0.05)。结论褪黑素预处理可减轻NAFLD大鼠肝缺血再灌注损伤, 其机制可能与激活Nrf2信号通路, 减轻脂质过氧化反应, 抑制铁死亡有关。
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