NT-3基因逆转录病毒表达载体的构建

作者：董智勇; 李忱; 陈东; 孟晓婷; 陈雷; 路来金

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2008, 24(11): 1072-1073+1078.

DOI：10.3321/j.issn:1007-8738.2008.11.011

• 神经营养素3
• 逆转录病毒载体
• 重组

目的:分离大鼠神经营养素-3(NT-3)基因,构建pLEGFP-NT3逆转录病毒表达载体。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠NT-3基因,克隆到测序载体pMD18-T中,测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-C1中,通过Lipofectamine 2000导入包装细胞PA317。结果:RT-PCR产物为776bp,经测序鉴定虽与GenBank中NT-3基因的序列相差1个碱基,但不影响NT-3蛋白质的表达;构建的pLEGFP-NT3重组载体经酶切鉴定,证实NT-3基因片段正确插入pLEGFP-C1载体中。转染包装细胞后,激光共聚焦显微镜下观察导入NT-3基因的PA317细胞发绿色荧光。结论:分离得到了大鼠NT-3基因成功构建了pLEGFP-NT3表达载体。

• 单位
  吉林大学第一医院; 广东医科大学; 吉林大学白求恩医学院