鸟苷酸结合蛋白GBP1和GBP2抑制猪轮状病毒体外复制

作者：陈姝宇; 朱雪蛟; 周金柱; 陶然; 张雪寒; 索朗斯珠; 贡嘎^*; 李彬^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 1-19.

• 猪轮状病毒
• GBP1
• GBP2
• 抗病毒
• 结构域

本研究旨在探究鸟苷酸结合蛋白1（guanylate-binding protein-1，GBP1）、鸟苷酸结合蛋白2（guanylate-binding protein-2，GBP2）的全长、片段、GTPase酶活性对猪轮状病毒（porcine rotavirus，PoRV）复制的影响。以猪肾细胞cDNA和GBP1、GBP2质粒为模板，PCR扩增出GBP1、GBP2基因的全长和截断体（G、M、E、ME区），克隆到pCDNA3.1（+）真核表达载体上。在恒河猴细胞（MA104）细胞上过表达或沉默GBP1、GBP2基因，探究对PoRV复制的影响。设置不同的时间点，筛选GBP1、GBP2对PoRV复制产生影响作用的时间点。应用泛GTPase酶抑制剂（CID-1067700）探究GBP1、GBP2的GTPase酶活性对PoRV的作用。通过免疫印迹法Western blot、荧光定量PCR、病毒毒价测定等方法检测GBP1、GBP2蛋白的表达情况，并研究其抗病毒功能。结果表明：成功构建pCDNA3.1（+）-GBP1-HIS和pCDNA3.1（+）-GBP2（47aa-592aa）、（131aa-592aa）-HIS重组质粒，经验证能够表达。PoRV在蛋白和mRNA水平上能显著促进GBP1、GBP2基因表达上调。过表达GBP1、GBP2基因能显著抑制PoRV复制，沉默GBP1、GBP2基因的表达能显著促进PoRV复制。成功构建并表达了GBP1、GBP2蛋白的G、M、E、ME结构域截断体。过表达截断体基因发现GBP1、GBP2的G区域抑制PoRV的复制。通过泛GTPase抑制酶活性，发现GBP1、GBP2抑制PoRV复制需要依赖GTPase酶活性。GBP1、GBP2蛋白能够抑制PoRV的复制，该抑制作用依赖GBP蛋白GTPase酶活性区域。研究结果为PoRV寻找新的药物靶点和研发新型疫苗提供理论依据。

• 单位
  西藏农牧学院; 动物科学学院; 江苏省农业科学院