基于CRISPR/Cas9技术构建BHV-1 gE缺失株及其免疫生物学特性初步鉴定

作者：穆艳霞; 张金玲; 刘春羽; 刘海瑞; 温永俊; 李光鹏; 杨洋^*

来源：农业生物技术学报, 2018, 26(12): 2003-2016.

• 牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)
• CRISPR/Cas9
• 同源重组
• 糖蛋白E基因(gE)

牛(Bos taurus)疱疹病毒Ⅰ型(Bovine herpes virus type I, BHV-1)可引发牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis, IBR),对养牛业造成巨大经济损失。基因缺失疫苗的广泛使用可有效减少BHV-1感染。为了更高效地构建基因缺失疫苗,本研究应用CRISPR/Cas9基因编辑与同源重组技术,构建带有增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein, EGFP)标记并缺失糖蛋白E基因(glycoprotein E, gE)的重组BHV-1病毒,命名为BHV-1 gE-/EGFP+。随后通过特异性的小向导RNA (small guide RNA, sgRNA)敲除BHV-1 gE-/EGFP+病毒基因组中的EGFP基因,该gE基因缺失株命名为BHV-1ΔgE。体外生物学特性分析显示,BHV-1ΔgE与亲本BHV-1具有相似的生长特性和噬斑形态。动物免疫实验结果显示,gE基因缺失没有改变BHV-1的免疫原性,BHV-1 gE缺失株可作为新型重组IBR疫苗的候选毒株。本研究首次利用CRISPR/Cas9系统对BHV-1 gE基因进行了缺失编辑,提供了一种高效的BHV-1基因缺失毒株的构建方法,为IBR基因缺失疫苗研制提供了实验依据。

• 单位
  内蒙古大学; 内蒙古农业大学