科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨死亡受体5(DR5)在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)中的作用及分子机制, 以及可溶性DR5(sDR5)对SAH的神经保护作用。方法实验1:将SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、SAH组(通过颈动脉穿刺法构建SAH模型), 其中SAH组进一步分为SAH后6 h组、SAH后12 h组、SAH后24 h组、SAH后48 h组、SAH后72 h组, 每组6只, 通过Western blotting实验检测每组大鼠相应时间点肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和DR5表达情况, 通过免疫荧光双染DR5与神经元核抗原(NeuN)判断DR5在神经元的表达情况。实验2:将SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、SAH组、Trail组(注射Dordaviprone)和Trail+sDR5组(注射Dordaviprone+sDR5), 每组6只。于SAH模型构建成功后第24小时行Western blotting实验检测caspase家族蛋白水平、tBid表达水平, 同时行Tunel染色及DR5、caspase-3免疫荧光双染。实验3:大鼠分组同实验2, 于SAH模型构建成功后第5、7、12天分别行长时程运动功能评估, 即改良Gracia评分、前肢放置实验、转棒实验和错步实验, 于SAH后第14、16、18、20、21天行水迷宫实验检测大鼠长期学习记忆功能。结果 (1)实验1结果显示:假手术组、SAH后6 h组、SAH后12 h组、SAH后24 h组、SAH后48 h组、SAH后72 h组大鼠TNF-α、DR5表达水平差异均有统计学意义(F=837.992, P<0.001;F=503.942, P<0.001), 第24小时达到最高峰。SAH后DR5与NeuN免疫荧光双染共定位结果提示DR5定位在神经元。(2)实验2结果显示:与SAH组及Trail组比较, Trail+sDR5组活化caspase-8、tBid与活化caspase-3水平均明显降低, Tunel阳性细胞数均明显减少, DR5与活化caspase-3双染共标阳性细胞数均明显减少, 差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)实验3结果显示:与SAH组和Trail组比较, Trail+sDR5组Garcia评分明显升高, 前肢放置实验失败率明显降低, 转棒上持续时间明显延长, 足失误率明显降低, 差异均有统计学意义(P<0.05), 提示sDR5可改善SAH后长期运动功能缺损。水迷宫实验结果显示, SAH后第21天, 撤除平台后, 与SAH组和Trail组大鼠比较, Trail+sDR5组大鼠在原平台象限的逃避时间和运动轨迹占总逃避时间和运动轨迹的比例均明显升高, 差异均有统计学意义(P<0.05), 提示sDR5可改善SAH后长期学习记忆功能缺损。结论 sDR5可抑制SAH后DR5-Trail介导的神经细胞凋亡并改善长期神经功能缺损。
- 单位
