截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定

作者：田江红; 雷迎峰; 尹文; 陈任安; 汪桦; 吕欣; 杨敬; 孙梦宁; 姚敏; 徐志凯

来源：科学技术与工程, 2010, (04): 863-867.

• HCV
• NS5B RNA聚合酶
• 大肠杆菌
• 蛋白表达 hepatitis C virus
• NS5B RNA polymerase
• E.coil
• protein expression

为构建HCV截短型ns5bΔ21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体。运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5bΔ21基因;克隆入原核表达载体pRSETA。将重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21转化BL21大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备...

• 单位
  第四军医大学