三阴乳腺癌细胞中Atg13基因的过表达与化疗耐药的研究

作者：刘永波; 邓丽; 郭怡辉; 李艳萍^*

来源：肿瘤代谢与营养电子杂志, 2019, 6(03): 310-315.

DOI：10.16689/j.cnki.cn11-9349/r.2019.03.008

• 三阴性乳腺癌
• 自噬
• Atg13
• 化疗耐药

目的探讨自噬相关基因13(Atg13)与三阴性乳腺癌的化疗耐药之间的关系。方法间歇刺激法构建对阿霉素耐受的MDA-MB-231 TNBC细胞株(命名为MDA-MB-231/Dox),并采用药物敏感实验和细胞凋亡实验(TUNEL染色)对耐药细胞株MDA-MB-231/Dox的耐药表型进行鉴定;蛋白免疫印迹实验检测敏感细胞MDA-MB-231和耐药细胞MDA-MB-231/Dox中的自噬相关蛋白LC3A、LC3B的表达情况,免疫荧光法测定细胞内的LC3B荧光斑点数;脂质体转染重组干扰质粒sh-Atg13至耐药细胞MDA-MB-231/Dox中,并经嘌呤霉素筛选得到稳转细胞(命名为MDA-MB-231/Dox+sh-Atg13),蛋白免疫印迹实验检测稳转细胞MDA-MB-231/Dox+sh-Atg13及空载体对照细胞MDA-MB-231/Dox+control plasmid中的Atg13蛋白表达水平,同时检测细胞内的自噬水平(自噬相关蛋白LC3A、LC3B的表达量及LC3B荧光斑点数)及各组细胞对Dox的药物敏感性。结果成功构建对Dox耐药的TNBC细胞株MDA-MB-231/Dox,并且发现耐药细胞中的基础自噬水平显著高于亲本细胞MDA-MB-231(P <0. 05)。重组干扰质粒sh-Atg13抑制Atg13基因表达后,使得耐药细胞MDA-MB-231/Dox中的自噬体标志分子LC3B蛋白表达量显著降低(P <0. 05),且耐药细胞对Dox的药物敏感性增加(IC5 0值显著降低,P <0. 05)。结论在TNBC细胞MDAMB-231中,Atg13参与了细胞对Dox获得性耐药的产生。

• 单位
  南昌市第一医院; 首都医科大学附属北京世纪坛医院