人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的基因构建、表达及鉴定

作者：苏燕胜; 高云; 付晓亮; 王东; 王倩云; 刘娜; 贾红兵; 秦卫军; 温伟红; 王禾

来源：中华男科学杂志, 2014, 20(12): 1063-1067.

DOI：10.13263/j.cnki.nja.2014.12.002

• 前列腺特异性膜抗原
• 单链抗体
• 融合蛋白
• 靶向输送

目的:分别构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(sc Fv)/鱼精蛋白截短体(tp)、sc Fv/弗林蛋白酶识别位点(Fdt)/流感病毒融合肽结构域(HA2)/tp融合蛋白基因。利用原核表达体系表达、纯化并检测sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,扩增融合基因sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp,将获得的基因克隆入原核表达载体p ET28,在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western印迹鉴定,通过Ni2+-NTA螯合层析纯化。ELISA分析融合蛋白抗原亲和活性。结果:成功构建了人源性抗PSMA融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达。表达的目的蛋白均能与PSMA抗原结合。结论:融合蛋白具有结合抗原的活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础。

• 单位
  西安交通大学第二附属医院; 西京医院; 唐都医院; 第四军医大学