LRRK2干扰对MPP~+诱导PD细胞模型线粒体功能的影响

作者：罗宁; 王春玲; 蒙冰; 周欣梅; 冯文勇; 李昌海; 文晓东^*

来源：中国神经免疫学和神经病学杂志, 2022, 29(01): 6-10+16.

• 帕金森病
• 富亮氨酸重复激酶2
• 线粒体功能
• 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶2
• AMPK通路

目的探讨富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)干扰对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型线粒体功能及CaMKK-β/AMPK通路的影响。方法采用MPP~+诱导传代培养的SH-SY5Y细胞构建PD细胞模型。将造模的SH-SY5Y细胞随机分PD模型组、空载转染组(空载转染PD模型细胞)和siRNA转染组(siRNA-LRRK2转染PD模型),另设正常对照组,每组设3个复孔。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞LRRK2 mRNA表达,采用免疫印迹(WB)法检测各组细胞LRRK2蛋白表达,采用JC-1探针法检测各组细胞线粒体膜电位,采用试剂盒检测各组细胞线粒体复合物I(Complex I)活性及ATP含量,采用WB检测各组细胞中CaMKK-β/AMPK通路相关蛋白CaMKK-β、AMPK和p-AMPK蛋白表达。结果与正常对照组相比,PD模型组LRRK2蛋白表达增加(P<0.05),线粒体膜电位下降,Complex I活性及ATP含量降低(P<0.05),CaMKK-β/AMPK通路蛋白CaMKK-β、AMPK、p-AMPKα(Thr 172)蛋白表达增加(P<0.05)。与PD模型组比较,siRNA转染组LRRK2 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),线粒体膜电位提升,Complex I活性及ATP含量增加(P<0.05),CaMKK-β、AMPK和p-AMPK蛋白表达降低(P<0.05)。结论 LRRK2干扰可改善MPP~+诱导的PD细胞模型中受损的线粒体功能,抑制CaMKK-β/AMPK信号通路。

• 单位
  神经内科; 广西中医药大学附属瑞康医院; 广西中医药大学