CpG ODN核心序列改变对其生物学活性的影响

作者：丁国富; 李斌; 吴翀; 罗平; 李军; 周红

来源：中国病理生理杂志, 2008, 24(10): 2025-2028.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2008.10.034

• CpG寡核苷酸
• 甲基化
• 受体,Toll样

目的:观察含CpG基序寡核苷酸(CpG ODN)核心序列改变后对其细胞内化和免疫活性的影响。方法:人工合成6-FAM标记的CpG ODN,将其核心序列CpG二核苷酸的胞嘧啶(C)甲基化(mCpG ODN)、胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)顺序颠倒(GpC ODN),在RAW264.7细胞培养体系中加入不同的ODN后,应用流式细胞术和激光共聚焦显微镜观察ODN的细胞内化与定位,ELISA法检测ODN对细胞释放TNF-α的影响。结果:CpG ODN核心序列的改变不影响其在细胞内的聚集,激光共聚焦术检测发现6-FAM ODN被内化进入RAW264.7细胞,绿色荧光小体呈散点状分布于细胞中;胞嘧啶甲基化后,mCpG ODN促细胞释放TNF-α的作用显著降低(P<0.01),仅保留部分刺激活性,但是GpC ODN几乎丧失了促细胞释放TNF-α的作用。结论:CG序列对CpG ODN的生物活性至关重要,胞嘧啶C甲基化不影响CpG ODN在细胞内的定位,但能部分抑制CpG ODN的免疫活性。

• 单位
  第三军医大学