p62敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用

作者：刘世玉; 冯学召; 古丽妮尕尔·司马义; 席庆; 阿仙姑·哈斯木; 米娜^*

来源：新疆医科大学学报, 2023, 46(09): 1119-1131.

• p62
• 选择性自噬
• 泛素化蛋白
• LC3

目的 探讨p62敲除对细胞自噬及泛素化蛋白募集的影响。方法 将野生型(Wild Type, WT)和p62基因敲除(p62 knockout, p62-KO)的大鼠肾上皮细胞(NRK)分别分为野生型阴性对照组(WT CT组)和野生型饥饿4 h组(WT Sta4 h组)、p62基因敲除阴性对照组(p62-KO CT组)和p62基因敲除饥饿4 h组(p62-KO Sta4 h组)。WT CT组和p62-KO CT组中加入普通培养基，对细胞进行空白对照处理；WT Sta4 h组和p62-KO Sta4 h组中加入饥饿培养基，对细胞进行饥饿4 h处理。免疫印迹法鉴定和检测p62基因的敲除及自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、泛素化修饰蛋白(Ub)的表达；电子显微镜观察自噬体形成；激光共聚焦显微镜法观察LC3蛋白阳性点状结构的数量。结果 鉴定p62基因成功被敲除。饥饿处理4 h后，WT和p62-KO细胞中均能观察到自噬结构(包括自噬体和自噬溶酶体)。与WT CT组比较，WT Sta4 h组中LC3蛋白酯化和Ub蛋白表达水平升高(P<0.05),LC3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P<0.01);与p62-KO CT组比较，p62-KO Sta4 h组中LC3蛋白酯化和Ub蛋白表达水平升高(P<0.05),LC3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P<0.01)。结论 p62参与细胞自噬并募集泛素化修饰蛋白，最终影响选择性自噬体底物的凝聚和降解。

• 单位
  新疆医科大学; 新疆医科大学第一附属医院; 生物化学教研室