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摘要
目的:为研究人参皂苷20(S)-达玛-20,25-环氧-3β,12β,24α-三醇(24-OH-PD)对多种癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法或Cell Titer Glo发光试验检测24-OH-PD在不同质量浓度(12. 5,25,50,100 mg·L-1),不同作用时间(24,48,72 h)下对CCRF-CEM,Jeko-1,M14,MD-MBA-231癌细胞的增殖抑制作用,并与20(R)-Rg3,20(S)-Rh2进行比较。采用流式细胞术检测24-OH-PD对以上4种癌细胞的凋亡诱导作用。采用药物设计平台薛定谔Maestro 6. 7软件对癌症相关的40种蛋白与24-OH-PD进行分子对接研究。结果:24-OH-PD对4种癌细胞均具有明显的细胞活性抑制作用,且具有时间、剂量依赖性。24-OH-PD对CCRF-CEM,Jeko-1,M14,MD-MBA-231细胞作用48 h时半抑制浓度(IC50)分别为25. 36,39. 29,21. 74,19. 35 mg·L-1,与20(S)-Rh2作用效果相似(IC50分别为23. 35,65. 79,18. 95,19. 67 mg·L-1);远远强于20(R)-Rg3,仅对Jeko-1细胞有抑制作用(IC5049. 5 mg·L-1)。磷脂结合蛋白V/碘化吡啶(Annexin V/PI)双染实验结果显示,24-OH-PD对4种细胞均具有不同程度的促凋亡作用(P <0. 05),且具有剂量依赖关系。分子对接实验表明32个癌症相关蛋白中有11个能够与24-OH-PD对接成功,包括嘌呤核苷磷酸化酶(PNP),蛋白络氨酸激酶,蛋白激酶C(PKC),B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2),B淋巴细胞瘤基因-xl (Bcl-xl),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-8等,表明24-OH-PD的抗肿瘤作用可能与直接作用于这些蛋白相关。结论:人参皂苷24-OH-PD对CCRF-CEM,M14,MD-MBA-231,Jeko-1癌细胞具有增殖抑制作用,其机制可能与PNP,PKC等蛋白相关;同时24-OH-PD还具有诱导癌细胞凋亡的作用,机制可能与Bcl-2,Bcl-xl等蛋白相关。
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