肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立

作者：徐云明; 魏利斌; 周弇扬; 李叶辉; 孙智远; 仲思远; 陈爱宁; 郭丽娟; 柳增善; 任洪林

来源：中国畜牧兽医, 2018, 45(11): 3003-3010.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2018.11.004

• 肺炎克雷伯菌
• 环介导等温扩增(LAMP)
• 检测

本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜碱、核酸原料(dNTPs)、内外引物比例、Mg2+浓度、反应时间和温度进行优化和选择,并进行特异性和灵敏性试验检测。应用建立的LAMP方法对灭菌鸡肉人工污染加标样品进行检测。结果表明,通过优化试验,筛选到最优反应体系和反应条件;应用优化后的LAMP反应体系对包括肺炎克雷伯菌在内的18种常见微生物进行特异性检测试验,特异性良好。肺炎克雷伯菌LAMP反应体系对基因组的最低检测限是0.875pg/μL,比传统PCR方法灵敏性高100倍。对人工鸡肉阳性样品进行检测,检测限为30CFU/mL。本试验成功建立了一种能检测食物中致病肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法,该方法利用2对引物针对肺炎克雷伯菌目的基因6个区域进行体外恒温核酸阶梯性扩增,灵敏性更高,反应时间更短,检测成本更低。

• 单位
  江苏农林职业技术学院; 吉林大学