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摘要
目的探讨血管紧张素1型受体(AGTR1)拮抗剂奥美沙坦(OMS)对人Tenon囊成纤维细胞(HTF)凋亡的作用及其机制。方法收集于西安交通大学第二附属医院行斜视手术的患者Tenon囊组织, 采用组织块法培养原代HTF, vimentin免疫荧光染色及流式细胞术鉴定原代细胞。采用10 ng/ml转化生长因子β2(TGF-β2)诱导HTF建立细胞纤维化模型。将体外培养的细胞分为正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组和OMS组, 各组细胞分别予以普通培养液、含TGF-β2的培养液、含TGF-β2和OMS的培养液、含OMS的培养液培养细胞48 h。Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡情况, 分析细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率。Western blot法检测线粒体凋亡途径中procaspase-9、cleaved caspase-9、bax和bcl-2蛋白表达水平。比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果成功分离培养原代HTF, 所培养细胞呈长梭形, vimentin免疫荧光染色呈阳性, 流式细胞术检测所培养原代细胞中vimentin表达阳性率>99%。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组和OMS组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率总体比较, 差异均有统计学意义(F=24.92、3.96、41.82, 均P<0.05), 其中TGF-β2+OMS组早期凋亡率和总凋亡率较正常对照组和TGF-β2组明显升高, TGF-β2+OMS组晚期凋亡率较正常对照组明显升高, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组和OMS组cleaved caspase-9/procaspase-9、bax、bax/bcl-2总体比较差异均有统计学意义(F=4.40、7.98、4.61, 均P<0.05), 其中TGF-β2+OMS组bax/bcl-2较正常对照组明显升高, TGF-β2+OMS组cleaved caspase-9/procaspase-9、bax、bax/bcl-2较TGF-β2组明显升高, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组、OMS组细胞LDH活性值分别为(783.99±79.97)、(913.16±196.86)、(2 529.06±240.21)、(2 134.29±138.96)μmol/(min·L), 总体比较差异有统计学意义(F=24.95, P<0.05), 其中与正常对照组和TGF-β2组比较, TGF-β2+OMS组和OMS组LDH活性值明显升高, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组、TGF-β2组、TGF-β2+OMS组、OMS组细胞SOD活性值分别为(50.35±0.97)、(41.61±4.56)、(28.88±3.26)、(37.61±4.83)μmol/(min·L), 总体比较差异有统计学意义(F=5.71, P<0.05), 其中TGF-β2+OMS组SOD活性值低于正常对照组和TGF-β2组, OMS组SOD活性值低于正常对照组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 AGTR1拮抗剂OMS可以有效促进HTF凋亡, bax/bcl-2/caspase-9介导的线粒体凋亡途径及氧化应激途径可能是OMS调控HTF凋亡过程的潜在机制。
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