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摘要
目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin对肝癌生长和运动转移能力的影响。方法选取4株肝癌细胞系(SF/SMMC7721、MHCC97-H、MHCC-1和HepG2)作为研究材料,针对ezrin基因设计小干扰RNA(siRNA)并通过脂质体转染入细胞。分别通过荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹验证siRNA对ezrin在基因和蛋白水平的下调及下调作用随转染时间的变化。根据Western印迹的结果选取ezrin蛋白表达最低的时间点检测干扰后肝癌细胞生物学行为的改变。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测肝癌细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞周期;电子显微镜观察细胞伪足的形态和数量改变;transwell实验检测肝癌细胞运动和转移能力的变化。结果荧光实时定量PCR和Western印迹显示ezrin siRNA对ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用。下调ezrin蛋白可显著减慢4株肝癌细胞的生长速度,处于分裂期的肝癌细胞比例明显下降(SF/SMMC7721:28·07%下降到21·53%;MHCC97-H:24·94%下降到13·92%;MHCC-1:19·30%下降到13·2%;HepG2:7·73%下降到4·24%)。肿瘤细胞的运动侵袭能力下降,细胞伪足变短,且伪足的形成数量显著减少(SF/SMMC7721:20·8个/细胞±3·0个/细胞与13·2个/细胞±2·4个/细胞,P<0·05;MHCC97-H:18·4个/细胞±2·7个/细胞与14·0个/细胞±2·9个/细胞,P<0·01;MHCC-1:22·6个/细胞±3·5个/细胞与13·3个/细胞±1·9个/细胞,P<0·01;HepG2:31·0个/细胞±2·9个/细胞与17·8个/细胞±2·3个/细胞,P<0·01;每株计数5个细胞)。穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少(SF/SMMC7721:49·9个±7·7个与31·9±5·2个,P<0·05;MHCC97-H:58·5个±4·2个与33·0个±3·3个,P<0·01;MHCC-1:57·6个±6·1个与28·3个±3·4个,P<0·01;HepG2:37·3个±3·0个与25·3个±2·3个,P<0·01;每株8个视野)。结论ezrin在肝癌生长和侵袭转移过程中发挥重要的作用,有可能成为抑制肝癌复发转移的关键分子。
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单位复旦大学附属中山医院; 复旦大学
