华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系

作者：郑**; 胡坤华; 刘炜; 余新炳

来源：南方医科大学学报, 2015, 35(05): 659-664.

DOI：10.3969/j.issn.1673-4254.2015.05.07

• 华支睾吸虫
• 钙调节蛋白
• 肝纤维化

目的对华支睾吸虫成虫(Clonorchis sinensis,Cs)钙调节蛋白(Ca M)进行生物学及功能分析,以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs c DNA质粒文库中寻找Cs Ca M全长序列,以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆,大肠杆菌表达,亲和层析纯化,并将纯化蛋白免疫大鼠,产生多克隆抗体。ELISA检测Cs Ca M抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析Cs Ca M重组蛋白纯化及其抗体识别效果。免疫组化分析其组织定位;腹腔注射法建立Cs Ca M致大鼠肝纤维化模型。结果重组、表达及纯化了Cs Ca M,其编码150位氨基酸,理论相对分子质量23 400。结构域预测其具有EF手位模序。p ET-30a-Cs Ca M重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌BL21 E.coli上清,相对分子质量约23 400。总Ig G抗体滴度于24周达较高峰,效价大于1∶51 200。免疫组织化学定位显示Cs Ca M在成虫睾丸表达丰富。Cs Ca M腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变,HE染色可见炎症反应较严重,可见气球样变、门管区炎及碎片状坏死;网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生,有轻到中度纤维化。结论 Cs Ca M促进大鼠肝脏炎症病变及纤维化的作用,提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院; 中山大学中山医学院; 中山大学