黄疸出血群钩端螺旋体LAMP-LFB快速检测方法的建立与应用

作者：王毅; 杨幸贵; 刘英; 黄俊飞; 王铭; 营夏; 谭勤琴; 胡勇; 李世军^*

来源：疾病监测, 2022, 37(05): 646-651.

• 环介导恒温扩增
• 纳米生物传感
• 钩端螺旋体
• 黄疸出血群

目的 基于环介导恒温扩增（LAMP）结合纳米生物传感条（LFB）技术，建立并评价黄疸出血群钩端螺旋体（钩体）的LAMP-LFB快速检测方法。方法 以黄疸出血群钩体O抗原基因簇中的糖基转移酶基因（gtf）为检测靶标并设计特异性LAMP引物。通过对LAMP引物的特定标记（FIP-FAM和LF-Biotin）和优化试验，建立LAMP-LFB快速检测方法，并分析其灵敏度和特异性。应用建立的LAMP-LFB、普通PCR方法和显微凝集试验（MAT），分别对53株钩体分离菌株进行鉴定，比较分析鉴定结果并评价LAMP-LFB方法的实用性。结果 灵敏度和特异性试验显示，LAMP-LFB方法可检出黄疸出血群赖型56601基因组DNA的最低浓度为100 fg/μL，检测特异性为100%，与其余血清群和非钩体菌株核酸无交叉反应。菌株鉴定结果显示，LAMP-LFB与MAT鉴定结果完全一致，符合率为100%，其敏感性高于PCR方法。此外，LAMP扩增产物经LFB验证，可直接通过观察检测线（TL）和质控线（CL）进行结果判定。结论 基于gtf基因建立的LAMP-LFB检测技术方便、快捷且重复性好，可快速、灵敏、特异地鉴定黄疸出血群钩体菌株，能够作为有价值的黄疸出血群钩体菌株快速鉴别或诊断方法。

• 单位
  贵州医科大学; 公共卫生学院; 贵州省疾病预防控制中心; 首都儿科研究所