金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响

作者：袁吉振; 杨杰; 袁文常; 胡珍; 尚伟龙; 张霞; 朱军民; 胡启文; 周人杰; 饶贤才

来源：第三军医大学学报, 2014, 36(04): 331-335.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2014.04.003

• 金黄色葡萄球菌
• 膜泡
• 同源重组
• 附属基因调节系统

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。

• 单位
  第三军医大学; 第三军医大学新桥医院