人角膜基质间充质干细胞的分离培养及表型鉴定

作者：刘先宁; 汪耀; 朱秀萍; 程燕; 潘士印; 肖湘华; 银勇; 安娜; 王亚妮; 刘睿

来源：现代检验医学杂志, 2019, 34(04): 28-30+34.

• 人角膜基质间充质干细胞
• 体外分离培养
• 表型鉴定

目的建立人角膜基质间充质干细胞(HCS-MSC)体外分离培养、传代和鉴定等方法。方法无菌条件下,取眼科临床角膜移植术后剩余的供体角膜缘组织,去除上皮和内皮组织,将基质组织切成1mm×2mm的组织块,采用无动物源性血清的间充质干细胞培养液进行组织块贴壁法培养,倒置显微镜下动态观察细胞的生长形态及贴壁状态,将传代培养后的第三代细胞采用流式细胞分析法进行表型鉴定,液氮冷冻保存。结果采用人角膜缘基质组织块贴壁法培养,于培养后第7天开始向周围呈放射状长出细胞,14天左右长满培养皿,细胞形态呈均一梭形;传代培养后生长快速,于2～4天达90%融合;连续传代3次,其生长特性和形态不变,CD90,CD29和CD105阳性率>95%,CD34和CD-HLA-dr阳性率<3%。结论采用人角膜缘基质组织可分离培养出间充质干细胞,为角膜组织修复、重建及对抗免疫排斥反应等奠定基础。

• 单位
  西安市第一医院; 西北大学; 陕西省眼科研究所