miR-124通过调节Jagged1/Notch信号通路影响肾细胞癌OS-RC-2细胞的恶性生物学行为

作者：张炜; 胡志^*; 付桥; 孙伟; 徐律; 褚浩; 王潇; 张志超

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2022, 29(08): 732-740.

• miR-124
• Jagged1/Notch信号通路
• 肾细胞癌
• OS-RC-2细胞
• 增殖
• 凋亡
• 迁移
• 侵袭

目的：探讨miR-124通过调节Jagged1(JAG1)/Notch信号通路对肾细胞癌(RCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：收集2018年6月至2021年10月在武汉市第三医院治疗的38例RCC患者的RCC组织和癌旁组织标本，并体外培养RCC细胞(Caki-2、A498、ACHN、786-O、OS-RC-2)和人正常肾细胞(293T)，采用免疫组织化学法、qPCR和WB法检测miR-124和JAG1蛋白在RCC组织和细胞中的表达水平。选择miR-124表达与293T细胞差异最大的OS-RC-2细胞进行转染，按转染物不同分为Control组、NC mimic组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组和miR-124 mimic+pc-JAG1组。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与JAG1的关系；q PCR法检测miR-124、JAG1 mRNA表达；免疫组化法分析JAG1蛋白表达；WB法检测JAG1、凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、BAX和Bcl2)和Notch信号通路相关蛋白(NICD、HES1和HES5)的表达；MTT法检测OS-RC-2细胞增殖；Transwell检测OS-RC-2细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测OS-RC-2细胞凋亡。结果：与癌旁组织比较，RCC组织中miR-124表达降低，JAG1 m RNA和蛋白表达均升高(均P<0.01)；与293T细胞比较，Caki-2、A498、ACHN、786-O、OS-RC-2细胞中miR-124水平降低，JAG1 m RNA和蛋白表达均升高(均P<0.05);miR-124直接负调控JAG1。与Control组和NC mimic组比较，miR-124 mimic组miR-124表达水平、细胞凋亡率以及cleaved caspase-3和BAX蛋白表达均升高，JAG1 mRNA和蛋白表达均降低，细胞活力(24、48、72 h)下降，迁移、侵袭细胞数减少，Bcl2及NICD、HES1、HES5蛋白表达降低(均P<0.05)；与miR-124 mimic+pcDNA组和miR-124 mimic组相比，miR-124 mimic+pc-JAG1组miR-124表达水平、细胞凋亡率以及cleaved caspase-3和BAX蛋白表达均降低，JAG1 m RNA和蛋白表达均升高，细胞活力(24、48、72 h)增加，迁移、侵袭细胞数增多，Bcl2及NICD、HES1、HES5蛋白表达均增加(均P<0.05)。结论：miR-124通过下调JAG1抑制Notch信号通路，降低RCC OS-RC-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力，促进细胞凋亡。

• 单位
  武汉市第三医院