Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建

作者：谭拥军^*; 吴莎莎; 谭桂湘; 向勤

来源：湖南大学学报(自然科学版), 2019, 46(12): 98-106.

DOI：10.16339/j.cnki.hdxbzkb.2019.12.014

• Bst DNA聚合酶
• 重组蛋白
• 扩增
• 核酸检测

Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement的原核表达质粒,采用原核蛋白表达系统和His-Tag亲和纯化手段,制备成本低,活性高,特异性强的Bst DNA聚合酶.同时,针对特定的模板,对自制Bst DNA聚合酶的扩增反应进行了进一步优化,用不同的产物鉴定方法对扩增效果进行检测,并最终筛选出该酶最优的扩增反应条件为60 mM K+、30 mM(NH4)2SO4、pH为9.0.最后,验证了Bst DNA聚合酶能用于快速准确检测肺炎支原体、肺炎衣原体,降低了相关病原体核酸检测的成本,为之后核酸检测在基层医疗的更广泛应用提供了条件.

• 单位
  湖南大学