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摘要
为了建立一套基于大肠杆菌表达系统的嵌合式高保真DNA聚合酶的重组表达与纯化的工艺，首先将含有目的基因的质粒转化至大肠杆菌BL21中，通过高压破碎仪进行细胞破碎，再用离子交换层析方法获得嵌合型高保真聚合酶。优化反应条件显示在28℃自动诱导下表达的嵌合DNA聚合酶蛋白产量较高。利用高压破碎仪将细胞破碎获得可溶蛋白，然后利用硫酸铵沉淀将蛋白粗纯，并采用离子交换层析柱纯化，最终获得较纯的DNA聚合酶。通过对获得的嵌合DNA聚合酶进行活性分析，证实该聚合酶具有高效的活性，为以后大规模生产高保真DNA聚合酶奠定基础。
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单位安阳工学院
