黔产宽叶缬草ISSR反应体系的建立与优化

作者：钱志瑶; 周道堂; 黄秀平; 周镁; 陈祖云; 覃容贵

来源：生物技术通报, 2015, 31(07): 69-75.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.011

• 宽叶缬草
• ISSR
• 单因素试验
• 正交设计
• 体系优化

旨在建立稳定、可靠的宽叶缬草ISSR反应体系。以10个水平单因素试验为基础,应用L16(45)正交设计对反应体系中4个主要因子在4个水平上进行组合优化,并采用直观法、极差法和方差法对试验结果进行分析;利用优化的反应体系,筛选引物以及最佳退火温度;同时,以9份不同产地宽叶缬草样品对反应体系进行稳定性检测。结果显示,宽叶缬草25μL ISSR最佳反应体系为:2.5μL 10×Taq Buffer,2.0 mmol/L Mg2+,0.28 mmol/L d NTPs,0.3μmol/L引物,1.75 U Taq DNA聚合酶,60 ng DNA模板,dd H2O补齐;影响大小依次是:Mg2+>引物>d NTPs>Taq DNA聚合酶;确定了各引物的最佳退火温度以及筛选出扩增条带清晰稳定的17条ISSR引物;稳定性实验表明,该体系稳定可靠。优化出宽叶缬草ISSR最佳反应体系并筛选出理想的引物。

• 单位
  贵州医科大学