杜氏肌营养不良基因突变检测国家参考品的研制

作者：于婷; 孙楠; 孙晶; 黄杰^*; 曲守方^*

来源：分子诊断与治疗杂志, 2021, 13(08): 1205-1208.

DOI：10.19930/j.cnki.jmdt.2021.08.002

• 杜氏肌营养不良基因
• 国家参考品
• 二代测序法
• 多重连接依赖性探针扩增

目的建立杜氏肌营养不良基因(DMD)突变检测国家参考品。方法收集DMD突变患儿及其家系血清,对建系成功的46份细胞系扩增繁殖至所需量后,进行基因组DNA提取并分装,制备成国家参考品。8家实验室采用8种二代测序(NGS)试剂和2种多重连接依赖性探针扩增试剂(MLPA)对候选参考品进行了验证。通过NGS和MLPA试剂检测候选参考品评价参考品的均匀性。通过NGS试剂对反复冻融3次后的候选参考品进行检测以评价稳定性。结果4家实验室采用MLPA试剂的检测结果一致,8家实验室采用NGS试剂的检测结果基本一致,对于突变位点信息有争议的参考品,采用一代测序进行了测序验证。NGS和MLPA各自均匀性检测结果均一致,反复冻融3次后的检测结果与常规保存的检测结果一致。结论通过协作验证以及均匀性、稳定性分析,成功建立了DMD突变检测国家参考品,该参考品可用于DMD基因突变检测试剂盒的性能评价。

• 单位
  中国食品药品检定研究院