携带人野生型PKGⅠα基因的重组腺病毒载体的构建及鉴定

作者：易斌; 陆俊羽; 白莉; 王关嵩; 钱桂生

来源：第二军医大学学报, 2009, (01): 69-72.

• PKGⅠ&alpha
• 基因
• 腺病毒载体
• 基因克隆
• DNA重组 PKGⅠ&alpha
• gene
• adenovirus vector
• gene cloning
• DNA recombination

目的:克隆人PKGⅠa基因,构建其重组腺病毒载体。方法:用RT-PCR方法从人肺动脉平滑肌组织中扩增PKGⅠa基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdTrack-PKGⅠα。PmeⅠ酶切pAdTrack-PKGⅠα,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pAdTrack-PKGⅠα转化至BJ5183感受态细菌中进行同源重组,PacⅠ酶切线性化重组质粒AdCMV-PKGⅠα后转染Ad293细胞进行病毒包装和扩增。检测PKGⅠα基因的表达,并用绿色荧光蛋白(GFP)法测定其滴度。结果:用RT-PCR方法,从人肺动脉中层扩增出PKG...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 新桥医院