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摘要
目的 建立同时测定3种碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸和组氨酸）含量的HPLC法，并测定该3种碱性氨基酸是否具有肝素中和作用。方法 采用异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生法。色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm），柱温30℃，以乙腈-乙酸钠溶液（冰醋酸调p H至6.3）为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 m L·min-1，检测波长254 nm，进样量20μL。将氨基酸混合液与肝素进行体外中和实验，测定混合前后氨基酸浓度的变化。SD大鼠注射肝素钠注射液后随机分为3组，空白对照组、实验组和阳性对照组大鼠分别注射生理盐水、氨基酸混合液或鱼精蛋白注射液，不同时间取血测定活化部分凝血活酶时间（APTT）。结果 3种氨基酸在5～100μg·mL-1范围呈线性，稳定性、精密度、回收率结果良好。体外肝素中和试验前后氨基酸浓度无显著变化。体内凝血试验显示，实验组与空白对照组APTT相近（P> 0.05），阳性对照组与空白对照组或实验组相比APTT明显延长（P <0.05）。结论 柱前衍生HPLC方法可以同时准确测定精氨酸、赖氨酸和组氨酸的含量，体内体外研究显示3种碱性氨基酸不具备肝素中和作用。
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单位河北医科大学第二医院
