猪脑心肌炎病毒VR-129B株VP2重组蛋白的构建表达及其免疫活性分析

作者：吴云; 赵月; 吴庆荣; 陈柯君; 张俊辉; 万华印; 李茹冰; 李健^*

来源：科学技术与工程, 2019, 19(34): 116-122.

DOI：10.3969/j.issn.1671-1815.2019.34.016

• 脑心肌炎病毒
• 重组质粒pDC315-EMCV-VP2
• 转染
• Q-PCR
• 免疫活性

为获得大量猪脑心肌炎VP2基因及蛋白研究的细胞模型,构建pDC315-EMCV-VP2真核表达载体,且将其转染到293T细胞,筛选出阳性质粒进行克隆。EMCV VR-129B株VP2基因序列参照GenBank(登录号:X74312),利用RT—PCR方法扩增VP2的全基因序列,将其与质粒pDC315经NheI和XhoI双酶切后连接,构建pDC315-EMCV-VP2重组表达质粒,并将其转染至293T细胞。使用荧光定量PCR方法观察pDC315-EMCV-VP2真核表达载体在细胞中的表达情况。双酶切PCR结果获得大小为780 bp的基因片段,测序结果显示与GenBank上已经公布的同名基因(登录号:X74312)序列片段同源性为100%,重组质粒构建成功。实时荧光定量PCR(QPCR)结果显示,重组质粒转染组与空质粒组之间相比,EMCV-VP2基因的表达量显著上调(P<0.001);在荧光显微镜下观察转染细胞,转染成功部分出现较亮绿色荧光,EMCV-VP2基因表达稳定。从转染细胞中提取重组蛋白与EMCV阳性血清和阴性血清进行ELisa反应,具有较好免疫活性。

• 单位
  广州市众为生物技术有限公司; 中国科学院大学; 广东药科大学; 中国人民解放军南部战区总医院