NK92细胞经非溶酶体途径快速生成并释放35kD颗粒酶B至靶细胞

作者：汪蕾; 江绍伟; 肖凌; 陈琳; 李安政; 郑芳

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2016, 32(02): 205-211.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.007657

• 颗粒酶B
• NK92细胞
• 分泌型溶酶体
• 细胞凋亡

目的探讨NK92细胞能否经非分泌型溶酶体途径分泌颗粒酶B(GZB)以及其可能的分泌机制。方法 NK92细胞作为细胞模型,经佛波酯(PMA)和离子霉素(ION)活化后4 h内,采用免疫荧光染色和胶体金标记免疫电镜技术检测NK92细胞胞质中蛋白合成功能被抑制前后相对分子质量(M_r)35 000和32 000 GZB的含量及其分布情况;采用Western blot法检测分离纯化分泌型溶酶体(SL)及不含溶酶体胞质中的GZB种类;通过EDTA抑制溶酶体的胞吐来阻断M_r32 000 GZB的释放,观察活化后NK92细胞上清中的M_r35 000 GZB含量;将活化的NK92细胞与K562细胞共培养,观察M_r35 000 GZB能否进入K562细胞;观察活化后NK92细胞的死亡率,并检测其分泌M_r35 000 GZB的酶活性。结果 NK92细胞PMA/ION刺激4 h后,在SL外的胞质中生成大量GZB,M_r为35 000区别于SL内GZB的M_r32 000。经免疫电镜和免疫荧光染色进一步显示,这些GZB位于溶酶体外的小囊泡内。同时,M_r35 000 GZB能被分泌至细胞外。进一步检测发现受到刺激的NK92细胞在SL外的胞质中同时出现GZB/丝氨酸蛋白酶抑制剂9(serpinb9)复合物以及M_r35 000 GZB,但死亡率未上升,与之相应的是SL内的GZB具有酶活性,SL外的M_r35 000 GZB为酶原形式,表明M_r35 000 GZB并非由SL漏出。结论人NK细胞内存在SL外无酶活性的M_r35 000 GZB,以非溶酶体途径快速生成方式分泌至细胞外,提供了部分细胞外的GZB。

• 单位
  湖北中医药大学; 华中科技大学同济医学院