4-羟基壬稀酸刺激人视网膜微血管内皮细胞的定量蛋白质组学研究

作者：肖静; 张晓敏; 邵先锋; 肖梦然; 杨付花; 张慧; Ea Vicki L; 李筱荣^*

来源：中华眼底病杂志, 2019, 35(05): 488-493.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2019.05.012

• 视网膜血管／细胞学
• 内皮细胞
• 细胞, 培养的
• 蛋白质组学
• 4-羟基壬稀酸

目的观察4-羟基壬稀酸(4-HNE)刺激人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)增生后蛋白表达变化。方法培养对数生长期hRMECs, 并将其分为4-HNE刺激组和阴性对照组。4-HNE刺激组加入浓度分别为5、10、20、50 μmol/L的4-HNE培养基, 并据此再分为不同浓度亚组;阴性对照组加入等体积无水乙醇(4-HNE的溶剂)培养基。刺激细胞24 h后加入CCK-8孵育4 h, 检测吸光度[A, 旧称光密度(OD )]值。采用基于超滤辅助样品制备酶切方法进行蛋白质谱样本制备, 非数据依赖的采集模式采集数据, 并对差异表达蛋白结果进行基因注释分析和通路富集分析。结果 CCK-8增生分析法结果显示, 10、20 μmol/L 4-HNE刺激组A值均高于阴性对照组和5 μmol/L 4-HNE刺激组, 差异有统计学意义(F=25.42, P<0.05);10、20 μmol/L 4-HNE刺激组之间A值差异无统计学意义(P>0.05);50 μmol/L 4-HNE刺激组A值较阴性对照组低, 差异有统计学意义(F=25.42, P<0.05 )。质谱共鉴定出2710个可定量蛋白。与阴性对照组比较, 10 μmol/L 4-HNE刺激组差异表达倍数大于1.5倍的蛋白118个, 差异有统计学意义(P<0.05 )。其中, 上调蛋白72个, 下调蛋白46个。10 μmol/L 4-HNE刺激组血红素氧合酶1、磺胺嘧啶1、热休克蛋白A1B、硫氧还蛋白还原酶1、谷胱甘肽还原酶、三磷酸腺苷(ATP)酶和凝血酶原等蛋白表达增加;载脂蛋白A1和程序性细胞凋亡因子4等表达降低。差异蛋白主要参与氧化应激、细胞解毒、ATP偶联的膜转运等生物学进程。结论 4-HNE刺激hRMECs时通过改变氧化应激、细胞解毒相关蛋白、ATP膜偶联等蛋白的表达, 共同调控细胞氧化应激和生长状态。

• 单位
  天津医科大学眼科医院