绵羊NYD-SP27基因真核表达载体的构建及表达

作者：陈云蕾; 赵新霞; 袁力明; 李娜; 赛务加甫^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2018, (18): 50-244.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.03.0256

• 绵羊
• NYD-SP27基因
• P2A
• 转染
• pmcherry-n1
• 自我剪切

为了构建绵羊NYD-SP27基因重组真核表达载体,进一步研究该基因的功能,试验根据GenBank中公布的绵羊NYD-SP27基因序列设计引物,克隆绵羊NYD-SP27基因,将其连接至真核表达载体pmcherry-n1中,在目的基因和红色荧光蛋白之间通过猪捷申病毒2A肽(P2A)连接以实现共表达,将重组质粒pmcherry-Flag-NYDSP-P2A转染至HEK-293FT细胞中,48 h后通过荧光显微镜可观察红色荧光,构建NYD-SP27真核表达载体成功。结果表明:重组质粒pmcherry-Flag-NYDSPP2A在HEK-293FT细胞中得以表达;P2A在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中已起到自我剪切的作用。

• 单位
  动物科技学院; 石河子大学